Влияния полипропиленовой сетки на локальную и системную продукцию цитокинов при торакопластике в эксперименте

Полный текст

Восстановление дефекта костного каркаса грудной клетки необходимо для обеспечения биомеханики дыхания и защиты внутренних органов. В отечественной и зарубежной хирургии накоплен значительный опыт применения синтетических трансплантатов, способных обеспечить стабильность грудной клетки. В основном исследователи подчеркивают преимущества применения плетеного полипропилена с разнонаправленной эластичностью, которая обладает необходимой ригидностью, инертностью, пластичностью и рентгенпрозрачностью [4, 7].

В процессе восстановления целостности поврежденных тканей участвуют не только клеточные элементы, но и факторы иммунной системы. Цитокины обеспечивают взаимодействие Т-, В-лимфоцитов и макрофагов в иммунном ответе регулируя заживление раны, способствуя формированию послеоперационного рубца [3]. Цитокины IFN-γ, ФНО-α секретируемые макрофагами и моноцитами обеспечивают мобилизацию воспалительного ответа, а ИЛ-10 – ингибирует избыточный синтез провоспалительных цитокинов [2, 5, 6]. Однако остается не до конца изученным вопрос об иммунной реактивности организма при применении сетчатых имплантатов в пластической хирургии грудной клетки [1, 7].

Цель исследования заключалась в экспериментальном изучении влияния полипропиленовой сетки «Surgipro - SPMM-149» на локальную и системную продукцию цитокинов при торакопластике.

Материалы и методы. Материалом для экспериментальных исследований явились крысы линии Вистар – 21 самцов массой 200-250 г. Поставка крыс осуществлялась из вивария Тихоокеанского института биоорганической химии ДВО РАН, Владивосток. Животные были распределены на 3 группы:

1 группа – основная (9 крыс), которым произведена мышечно-апоневротическая пластика грудной клетки после удаления заднего отрезка IV ребра размером 1,0 см;

2 группа – сравнения (9 крыс), которым произведена пластика грудной клетки после удаления заднего отрезка IV ребра размером 1,0 см с наложением поверх дефекта полипропиленовой сетки «Surgipro - SPMM-149» размером 1,0х1,0 см;

3 группа – контроля (3 крысы), интактные.

Животных выводили из опыта на 1, 10 и 30 сутки с момента операции. Вырезали лоскут ткани, содержащий мышечно-апоневротический рубец с имплантатом. Осуществляли забор сыворотки крови. Эксперимент проводился со строгим соблюдением требований Европейской конвенции (Страсбург, 1986) по содержанию, кормлению и уходу за подопытными животными, а также выводу их из эксперимента и последующей утилизации. В постановке опытов руководствовались требованиями Всемирного общества защиты животных (WSPA) и Европейской конвенции по защите экспериментальных животных. Исследование одобрено междисциплинарным этическим комитетом.

Определение цитокинов ФНО-α, IFN-γ, ИЛ-10 в сыворотке крови и мышечно-апоневротическом рубце производили методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием наборов: Rat «R&D Diagnostics Inc.». Биоптаты мышечно-апоневротического рубца после фиксации в формалине по стандартной методике готовили гистологические срезы, которые окрашивали гематоксилин-эозином, метиленовым синим и определяли клеточный состав.

Математическая обработка результатов исследования проведена с использованием программы Microsoft Excel 2010, Statistica 6.0 и SPSS 12.0. Для представления данных рассчитывалось среднее значение показателя и стандартное отклонение. При выполнении условия нормальности распределения (тест Колмогорова-Смирнова) статистическую значимость различий (р) определяли с помощью t критерия Стьюдента. Различия считали статистически значимыми при р<0,05.

Результаты. Исследование сыворотки крови в группе контроля (n=3), определило показатели цитокинов ФНО-α, IFN-γ, и ИЛ-10 на уровне 0,36±0,02 пг/мл, 2,45±0,12 пг/мл, и 5,39±0,18 пг/мл. Концентрация цитокинов в мышечно-апоневротическом слое зарегистрирована на цифрах 1,12±0,04 пг/мл, 1,4±0,09 пг/мл и 1,6±0,13 пг/мл, соответственно.

В экспериментальной группе исследования с мышечно-апоневротической пластикой в сыворотке крови, отмечено увеличение уровня ФНО-α, IFN-γ и ИЛ-10 с первых суток. Степень изменений в сравнении с контрольными данными носил значимый характер и отмечался во всех контрольных точках (р<0,05), достигая пика на 10-е, сутки.

В группе с пластикой сетчатым имплантатом, в сыворотке крови, зафиксированы повышенная продукция ФНО-α, IFN-γ (р<0,05) и снижение показателей ИЛ-10 относительно группы контроля (р<0,05), достигая наивысшую точку на 10-е сутки эксперимента.

При сравнении показателей цитокинов 1-й и 2-й группах на 1-е, 10-е и 30-е сутки с момента операции отмечены статистически значимые различия (р<0,05), практически по всем измерениям и отражена в таблице 1.

 

Таблица 1. Концентрация цитокинов в сыворотке крови, пг/мл (M±m)

Table 1. Concentration of cytokines in blood serum, pg/ml (M±m)

Показатель/ Index	Этап/ Stage	1 группа/1st group (n=9)	2 группа/2nd group (n=9)
ФНО-α	1-е сутки	9,8±0,12†	10,58±0,24†*
	10-е сутки	13,2±0,39†	14,4±0,1†*
	30-е сутки	11,66±0,26†	11,84±0,17†
IFN-γ	1-е сутки	11,68±0,28†	11,65±0,23†
	10-е сутки	15,14±0,32†	18,11±0,13†*
	30-е сутки	16,56±0,22†	18,03±0,04†*
ИЛ-10	1-е сутки	8,56±0,1†	0,73±0,09†*
	10-е сутки	13,16±0,07†	6,3±0,12†*
	30-е сутки	11,1±0,2†	3,75±0,17†*

Примечание: † - значимая разница данных с группой контроля (p<0,05); * - значимая разница данных с 1-й группой (p<0,05)

Note: † - significant difference in data with the control group (p<0,05); * - significant difference in data with group 1 (p<0,05)

 

Исследование экспрессии цитокинов в рубце свидетельствует, что после мышечно-апоневротической пластики отмечена гиперподукция ФНО-α и IFN-γ (р<0,05), относительно группы контроля. При этом, снижаются показатели противовоспалительного цитокина (р<0,05).

Полученные данные при торакопластике сетчатым имплантатом, так же указывает на гиперпродукцию провоспалительных цитокинов и снижении концентрации ИЛ-10 в рубце, относительно группы контроля (p>0,05).

Пиковая продукция цитокинов в обеих опытных групп зарегистрирована на 10-е сутки эксперимента. Разница между показателями цитокинов 1-й и 2-й групп статистически значима на 1-е, 10-е и 30-е сутки с момента операции (р<0,05) и отражена в таблице 2.

 

Таблица 2. Концентрация цитокинов в рубце, пг/мл (M±m)

Table 2. Concentration of cytokines in the rumen, pg/ml (M±m)

Показатель/ Index	Этап/ Stage	1 группа/1st group (n=9)	2 группа/2nd group (n=9)
ФНО-α	1-е сутки	2,7±0,13†	3,11±0,07†*
	10-е сутки	5,91±0,1†	13,24±0,37†*
	30-е сутки	4,16±0,17†	5,69±0,26†*
IFN-γ	1-е сутки	22,22±0,1†	24,03±0,09†*
	10-е сутки	29,69±0,26†	38,51±0,27†*
	30-е сутки	28,8±0,27†	29,07±0,16†*
ИЛ-10	1-е сутки	0,95±0,05†	2,37±0,2†*
	10-е сутки	3,41±0,13†	3,78±0,14†*
	30-е сутки	0,55±0,11†	1,34±0,04*

Примечание: † - значимая разница данных с группой контроля (p<0,05); * - значимая разница данных с 1-й группой (p<0,05)

Note: † - significant difference in data with the control group (p<0,05); * - significant difference in data with group 1 (p<0,05)

 

Сравнение показателей экспрессии провоспалительных цитокинов при торакопластике сетчатым имплантатом в сравнении с пластикой местными тканями установило статистически значимые различия в сторону увеличения (р<0,05) во всех точках контроля. При этом, снижение уровня цитокина ИЛ-10 при мышечно-апоневротической пластике в разы отличается от пластики имплантатом (р<0,05).

Изучение процессов, происходящих в грудной стенке и плевральной полости после пластики с синтетическим сетчатым имплантатом, показало, что на 10-е и 30-е сутки в биоптатах наблюдается морфологическая картина острого асептического воспаления, приводящая к развитию сращений между поверхностью легкого и грудной стенкой.

Обсуждение. Исследование подтвердило, что операция оказывает влияние на повышение системного уровня про- и противовоспалительных цитокинов во всех экспериментальных группах в ответ на хирургическое вмешательство. Выраженная системная продукция ФНО-α способствует быстрой регенерации раны, из-за способности данного цитокина вызывать генерацию активных форм кислорода фагоцитами, увеличивать секрецию простагландинов, оказывать хемотаксическое действие на различные клетки, обусловливать синтез белков острой фазы воспаления и активировать апоптоз поврежденных клеток [8, 9].

Экспрессия показателей цитокинов ФНО-α и IFN-γ в сыворотке крови и биоптате при различных способах операции носила равнонаправленный характер и значимо отличалась от контрольных данных, в сторону увеличения (p<0,05).

Однако при торакопластике сетчатым имплантатом отмечено снижение системной продукции ИЛ-10. Кроме того сетка снижала локальную продукцию противовоспалительного цитокина. Что по нашему мнению свидетельствует о локальной реактогенности полипропиленового имплантата. При этом, исследование локальной продукции ИЛ-10 в группе с мышечно-апоневротической пластикой, так же, выявило уменьшения в несколько раз концентрации противовоспалительного цитокина с первых суток (p<0,05).

Таким образом, согласно полученным нами данных, оперативное вмешательство на грудной стенке приводит к увеличению уровня провоспалительных цитокинов с первых суток, что свидетельствует о системной воспалительной реакции. При этом выработка противовоспалённого ИЛ-10 фиксировался на значениях ниже контрольных. Что свидетельствует, по нашему мнению о снижении супрессивной активности цитокина в подавлении местной и системной воспалительной реакции.

Заключение. Проведенное экспериментальное исследование выявило, что применение сетчатого эндопротеза при восстановлении дефекта каркаса грудной клетки вызывает более выраженную системную и локальную продукцию цитокинов ФНО-α, IFN-γ и снижает выработку ИЛ-10.

 

 

 

 

Дополнительная информация

 

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии у них конфликта интересов.

Conflict of interests. The authors declare that there is not conflict of interests.

 

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.

Financial support. No financial support has been provided for this work.

Об авторах

Сергей Анатольевич Белов

Приморский краевой противотуберкулёзный диспансер, Владивосток

Автор, ответственный за переписку.
Email: sur_belove@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-5325-2891
SPIN-код: 6588-1047
ResearcherId: C-7576-2019

к.м.н., торакальный хирург 4-го легочного хирургического отделения

Россия, 690041, г. Владивосток, ул. Пятнадцатая, д.2

Александр Анатольевич Григорюк

ФГБОУ ВО ТГМУ Минздрава России

Email: aa_grig@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-7957-5872
SPIN-код: 4321-6702
ResearcherId: C-8982-2019

к.м.н., доцент кафедры института хирургии

Россия, 690002, г. Владивосток, ул. Острякова, д.2.

Список литературы

Дополнительные файлы